血管内支架薄截面显微试样的制备
支架是用一种镍钛合金制造的。对于不同的支架设计、材料、表面涂层,正确的制备技术将会增强对细胞组织对临床安装支架(特别是在细胞组织与支架的界面处)的反应。此外,它还可以对扩展特性进行周密的评估。这种观察甚至能导致研制出经过改进的支架设计。
为此我们将我们的全部制备经验进行详尽介绍。
试样制备步骤
1. 切除安装有支架的动脉,用盐水冲洗并浸入盐水中固定两小时。
2. 取薄切片之前先将安装有支架的动脉进行镶嵌。EpoThin®,是一个非常好的选择,收缩率最小,在取薄切片的过程中不会使镶嵌材料发生软化,一种低粘度环氧树脂。
3. 在用精密切割机进行切割前,先用600号(P1200)和120号(P2500)CarbiMet®碳化硅砂纸,在MetaServ® 2000型磨光/抛光机或类似的设备上将镶嵌好的试样端面磨光。
4. 用接触粘合剂将磨光表面粘接在承物玻璃片上。用 perspex (一种介电有机玻璃) 做的承物片对镶嵌截面可提供比普通承物玻璃片更大的粘合力。不过,用 600号(P1200)CarbiMet® 碳化硅砂纸对普通承物玻璃片进行预磨光也能改善其粘合性能。
5. 选择一种能使切割损耗最小的切割片进行切割。粘接了立方氮化硼的 IsoCut® 型薄切割片能够在每15 mm 的支架上能再现地切割出28至30个截面。
6. 将经过镶嵌的试样装在 IsoMet® 型精密切割机上夹住。从试样承物玻璃片一端截取50 至100μm 厚的截面。
7. 重复步骤3和4,制备下一个截面的表面。重复这一过程并将陆续得到的截面分别粘接在承物玻璃片上。
8. 用一系列的CarbiMet® SiC砂纸磨光,先从320号 (P400) 砂纸开始,接着使用360号 (P500)、400号(P800)、600号(P1200)、1200号(P2500)砂纸,将每个截面磨光至厚度为10–20 μm。磨光时要仔细,避免使材料去除过快和不均匀,这样固定在砂纸纸基上的SiC磨料颗粒不至于嵌入试样中的细胞组织部分。
9. 用3 μm 的 UltraPrep™ A 型金刚石研磨薄膜进行抛光,然后就可以进行显微观察。
自动化制备设备/特殊夹具
用手工方法磨薄截面试样也容易将试样磨偏,试样应当磨光至5 μm 并且厚度均匀。表面和厚度不均匀的截面试样不能为组织化学分析提供最佳的条件。为了避免这样的问题发生,可以使用组织学精密磨光夹具 (产品编号60-8087) 具有用碳化物做的止动装置。夹具适用的承物玻璃片尺寸为27 x 46mm。
大多数半自动磨光/抛光机再加上岩相学和组织学用的薄截面承物片夹持器 (产品编号69-158)并使用单独加载方式,就可以使磨光过程自动化。
专家建议
在此,建议使用便携式BioThin™型薄截面切割装置(产品编号38- 2100)用来切割厚度为5μm的截面。这个全封闭系统使用滚珠轴承来控制所施加力的大小和承物片的定位。对于染色前的最终减薄,建议使用磨料尺寸为3μm 的 UltraPrep™ A 型金刚石研磨薄膜。
设备*
Cast N’ Vac 型真空浇注系统
IsoMet® 系列线性精密切割机
MetaServ® 2000型磨光/抛光机